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流式細胞儀的調(diào)試和校準方法

更新時間:2023-02-22

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   流式細胞儀是一種用于分析細胞的技術,包括細胞計數(shù)、表型、細胞周期評估和生存能力。流式細胞儀中激光器產(chǎn)生的光被樣品中的細胞散射,由檢測器測量,然后轉(zhuǎn)化為可分析和測量的信號。
  調(diào)試和校準
  流式細胞儀在使用前,甚至在使用過程中都要精心進行調(diào)試,以保證工作的可靠性和最佳性。調(diào)試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區(qū)的光路等。
  激光強度:除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長的激光出光外,還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為最大。
  液流速度:可通過操作臺數(shù)字顯示監(jiān)督,調(diào)節(jié) 氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。
  測量區(qū)光路調(diào)節(jié) :這是調(diào)試工作的關鍵。需要保證在測量區(qū)的液流、激光束、90散射測量光電系統(tǒng)垂直正交,而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。
  流式細胞術中所測得的量是相對值,因此需要在使用前或使用中對系統(tǒng)進行校準或標定,這樣才能通過相對測量獲得絕對的意義。因而FCM中的校準具有雙重功能:儀器的準直調(diào)整和定量標度。標準樣品應該穩(wěn)定,有形成份形狀應是大小比較一致球形,樣品分散性能良好,且經(jīng)濟、容易獲得。常用標準熒光微球作為非生物學標準樣品,雞血紅細胞做為生物學標準樣品。微球用樹脂材料制作,或標有熒光素,或不標記熒光素。所用的雞血紅細胞標準樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4),經(jīng)PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細胞混合,室溫下振蕩醛化24h,最后經(jīng)PBS再清洗,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經(jīng)熒光染色,所測光信號為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光。
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